臨床基因擴增實(shí)驗又稱(chēng)PCR實(shí)驗，這種實(shí)驗需要有能保證安全、配置合理的實(shí)驗室和非常規范的操作為前提。近年來(lái)對臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室的建設越來(lái)越得到重視，因為它對檢測結果的可靠性、準確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。博泰小編帶大家了解標準的PCR實(shí)驗室建設相關(guān)知識。

一、PCR實(shí)驗室平面布局

臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室原則上分為四個(gè)單獨的工作區域：試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配制和擴增區、擴增產(chǎn)物分析區。為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區域必須嚴格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產(chǎn)物分析區。各實(shí)驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過(guò)傳遞窗進(jìn)行。

二、實(shí)驗室空調通風(fēng)系統設計及壓力控制

PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗區域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗區的壓力要求。

1、試劑貯存和準備區

該實(shí)驗區主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區，不得經(jīng)過(guò)其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內，并在本區內制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制，本區并沒(méi)有嚴格的要求。

2、標本制備區

該區域主要進(jìn)行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進(jìn)入本區的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì )發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區內不必要的走動(dòng)。

3、擴增反應混合物配制和擴增區

該區域主要進(jìn)行的操作為DNA或CDNA擴增。已制備的DNA模板和合成的的加入和主反應混合液制備成反應混合液等也可在本區內進(jìn)行。在巢式PCR測定中，通常在一輪擴增后必須打開(kāi)反應管，因此巢式擴增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區內進(jìn)行。本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區內的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應在超凈臺內進(jìn)行。

4、擴增產(chǎn)物分析區

該區域主要進(jìn)行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測，此區域可不設。本區是最主要的擴增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此對本區的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區擴散至其它區域。

三、污染的預防與控制

PCR實(shí)驗室設計的核心問(wèn)題是如何避免污染。在實(shí)際工作中，常見(jiàn)的有以下幾種污染類(lèi)型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實(shí)驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實(shí)驗結果必須作廢，需重新進(jìn)行實(shí)驗。所以發(fā)生污染后再?lài)@實(shí)驗室來(lái)尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染先應是預防，而不是排除。

1、工作區域的嚴格劃分

（1）各個(gè)實(shí)驗區域設置合理；

（2）各個(gè)實(shí)驗區域要有明顯的標記（如醒目的門(mén)牌或不同的地面顏色等），以避免各個(gè)不同實(shí)驗區域設備物品、試劑等發(fā)生混淆。

2、合理的系統設置

（1）合理的空調通風(fēng)系統設置，盡量采用全送全排的空調系統；

（2）嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實(shí)驗區內不同的壓力要求。

3、規范的操作

（1）臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓，經(jīng)培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；

（2）在實(shí)驗操作過(guò)程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施；

（3）清潔工作及時(shí)、正確。實(shí)驗工作結束后，必須立即對本區進(jìn)行清潔。除常規的消毒液體對表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線(xiàn)燈的照射消毒外，對一些實(shí)驗設備還應進(jìn)行高壓消毒處理。

4、嚴格的管理

（1）嚴格控制進(jìn)出實(shí)驗室的人員。與實(shí)驗無(wú)關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗室，有條件的情況下要設置獨立的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗區的門(mén)；

（2）在各個(gè)實(shí)驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服（如不同顏色），當工作人員離開(kāi)時(shí)不得將本區的工作服帶至其它區域；

（3）盡量減少在實(shí)驗區內不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。

（4）擴增產(chǎn)物分析區是最主要的擴增產(chǎn)物污染來(lái)源，廢液不能在實(shí)驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實(shí)驗室的地方棄掉，用過(guò)的吸頭等一次性材料也應經(jīng)消毒液浸泡消毒后統一處理，如焚燒等；

（5）擴增產(chǎn)物分析區可能會(huì )用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應特別注意實(shí)驗人員的安全防護。

5、完備的實(shí)驗室配套設施

完備的實(shí)驗室配套設施是保證實(shí)驗工作的必要條件，應根據各個(gè)實(shí)驗室實(shí)驗內容的不同配備相應的設備和儀器，如超凈工作臺、離心機、加樣器等。