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發(fā)布時(shí)間: 2021-06-07 點(diǎn)擊次數: 869次PCR實(shí)驗室又叫基因擴增實(shí)驗室,是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。通過(guò)DNA基因追蹤系統,能迅速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別。博泰小編帶大家了解pcr實(shí)驗室建設規劃的要點(diǎn)有哪些。
一、PCR實(shí)驗室建設規劃要點(diǎn)
1、主體結構:
主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽(yáng)角均采用鋁合金50內圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問(wèn)題。結構牢固,線(xiàn)條簡(jiǎn)明,美觀(guān)大方,密封性好。
2、標準的三區分隔和氣壓調節:
將PCR過(guò)程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增檢測三個(gè)獨立的實(shí)驗區。整個(gè)區域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨立實(shí)驗區設置有緩沖區,同時(shí)各區通過(guò)氣壓調節,使整個(gè)PCR實(shí)驗過(guò)程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染??纱蜷_(kāi)緩沖區Ⅰ,緩沖區Ⅱ和 PCR 擴增區的排風(fēng)扇往外排氣,在實(shí)驗區的外墻上和各扇門(mén)上都安裝有風(fēng)量可調的回風(fēng)口,空氣通過(guò)回風(fēng)口向室內換氣。
3、消毒:
在三個(gè)實(shí)驗區和三個(gè)緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑準備區和標本制備區 還設置移動(dòng)紫外線(xiàn)燈,對實(shí)驗桌進(jìn)行局部消毒。
4、機械連鎖不銹鋼傳遞窗:
試劑和標本通過(guò)機械連鎖不銹鋼傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過(guò)程中不受污染。
5、地面
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進(jìn)行清掃,耐腐蝕。沒(méi)有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚接縫需要小于2mm。
6、照明
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。在建設的過(guò)程中應注意:
1、規范的安裝流程和全面的服務(wù)流程。
2、嚴格按照規范科學(xué)設計的安裝流程。
3、安裝前需要確定以下安裝條件,如:電源電壓,電源進(jìn)線(xiàn)位置,電話(huà)網(wǎng)絡(luò )線(xiàn)進(jìn)線(xiàn)位置,進(jìn)水水壓,地面平整度,通風(fēng)孔、進(jìn)水管和下水管的位置等,理想狀態(tài)的空間尺寸和通風(fēng)口尺寸。
二、設計要點(diǎn)
PCR實(shí)驗室可以是分散形式,也可以是組合形式。完成一組PCR實(shí)驗,通常應經(jīng)過(guò)試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗過(guò)程,若實(shí)驗工藝需要,還應增加樣品粉碎過(guò)程。
1、分散形式PCR實(shí)驗室
所謂分散形式PCR實(shí)驗室,是指完成上述實(shí)驗過(guò)程的實(shí)驗用房彼此相距較遠,呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR實(shí)驗室,由于各個(gè)實(shí)驗之間不易相互干擾,因此無(wú)需特殊條件要求。
2、組合形式PCR實(shí)驗室
所謂組合形式PCR實(shí)驗室,是指完成PCR四個(gè)實(shí)驗過(guò)程的實(shí)驗用房相鄰布置,組成獨立實(shí)驗區域的形式。對于組合形式PCR實(shí)驗室,由于各個(gè)實(shí)驗間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對總體布局以及屏障系統具有一定的要求。各室在入口處設緩沖間,以減少室內外空氣交換。
三、主要設備試劑準備區
儀器設備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和離心機等,加樣器、天平除了要專(zhuān)用外,還應有定期校準。試劑分裝應在超凈臺中進(jìn)行擴增反應混合液應使用分子生物學(xué)級的,試劑制備好后應有質(zhì)檢:是否有污染、是檢測試劑的擴增效果。
1、標本制備區
儀器設備主要有生物安全柜、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器等
2、擴增區
擴增區的主要儀器是核酸擴增儀、超凈臺、微量加樣器、離心機、可移動(dòng)紫外燈。擴增儀需進(jìn)行校準。并配備UPS電源,以防止由于電壓的波動(dòng),停電對擴增效果的影響。
3、分析區
本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實(shí)驗區的緩沖間部分面積不能超過(guò)主實(shí)驗室的八分之一,這是有規定的。
四、不可忽略的設計
1.實(shí)驗室空調通風(fēng)系統設計及壓力控制
PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗區的壓力要求。
2.污染的預防與控制
PCR實(shí)驗室設計的核心問(wèn)題是如何避免污染。在實(shí)際工作中,常見(jiàn)的有以下幾種污染類(lèi)型:擴增產(chǎn)物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,實(shí)驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實(shí)驗結果必須作廢,需重新進(jìn)行實(shí)驗。所以發(fā)生污染后再?lài)@實(shí)驗室來(lái)尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,先應是預防,而不是排除。
五、*的嚴格管理
1、嚴格控制進(jìn)出實(shí)驗室的人員。與實(shí)驗無(wú)關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗室,有條件的情況下要設置獨立的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗區的門(mén);
2、盡量減少在實(shí)驗區內不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。
3、擴增產(chǎn)物分析區是主要的擴增產(chǎn)物污染來(lái)源,廢液不能在實(shí)驗室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實(shí)驗室的地方棄掉,用過(guò)的吸頭等一次性材料也應經(jīng)消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等;
4、擴增產(chǎn)物分析區可能會(huì )用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應特別注意實(shí)驗人員的安全防護。